Для определения наличия острого токсического дейст­вия сточной воды на сбросе в водный объект воду тестиру­ют без разбавления. Если требуется сравнить степень токсичности сточной воды, отобранной из разных мест или в разное время, готовят серию разбавлении (не менее трех).

Объем пробы воды для биотестирования без разбавле­ния — 500 мл, с учетом разбавлении — 1 л.

Посадку дафний в сосуды для биотестирования проводят следующим способом: стеклянной трубкой диаметром 0,5 — 0,7 см отлавливают дафний из культуры, помещают в сачок из планктонного газа, погрузив его в тестируемую воду, пе­реводят в нее дафний, посадку ведут от разбавлении тести­руемой воды с большей кратностью к меньшей.

В сосуды наливают по 300 мл контрольной и тестируе­мой воды или ее разбавлении. Повторность трехкратная. В каждый сосуд помещают по 10 односуточных дафний и экспонируют при оптимальных условиях в тече­ние времени до 96 ч. При кратковременном биотестировании дафний не кормят.

Учет выживших дафний проводят через 1, 6, 24, 48, 72, 96 ч. Особей считают выжившими, если они свободно передвигаются в толще воды или всплывают со дна сосуда не позднее 15 с после его легкого покачивания. Если в любой считываемый период времени в сточной воде гибнет 50 и более процентов дафний, биотестирование прекращают.

Для определения наличия хронического токсического действия воды в контрольном и других створах водного объекта воду тестируют без разбавления. Если требуется сравнить степень токсичности разных проб воды или ис­пользовать результаты биотестирования при установлении величин ПДС, готовят серию разбавлении. Определяют ми­нимальную кратность разбавления, при которой хроническое токсическое действие не проявляется.

Объем пробы воды для биотестирования без разбавле­ния — 1 л, с учетом разбавлении — 3 — 5 л.

В сосуды наливают по 300 мл контрольной и тестируе­мой воды или ее разбавлении. Повторность трехкратная. В каждый сосуд вносят одинаковое количество корма, поме­щают по 10 двухсуточных самок дафний и экспонируют при оптимальных условиях. Дафний кормят ежесу­точно. Три раза в неделю в сосудах с дафниями производят смену контрольной и тестируемой воды на свежеотобранную. При смене воды дафний кормят за 3 ч до смены. Допуска­ется использовать воду, хранящуюся в холодильнике.

С момента появления молоди, в те сутки, когда меняют воду, производят учет выживших исходных самок и выме­танной молоди. Для этого самок с помощью стеклянной трубки пересаживают в заранее подготовленные сосуды с контрольной и тестируемой водой (соответственно) и под­считывают их количество в каждом сосуде. Оставшуюся во­ду процеживают через сито из планктонного газа. При этом на сите остается выметанная молодь, которую подсчитыва­ют и удаляют.

После того, как в контроле все исходные самки дадут по четыре помета, биотестирование заканчивают. Время биотестирования сокращается, если при промежуточном под­счете устанавливают достоверное отличие от контроля пока­зателя выживаемости или плодовитости дафний.

При биотестировании сточной воды на сбросе в водный объект рассчитывают процент по­гибших дафний в тестируемой воде по сравнению с контро­лем

А = (N2/N1) * 100% (3.1)

N1 – среднее арифметическое количество дафний, вы­живших в контроле;

N2 – среднее арифметическое количество дафний, вы­живших в тестируемой воде.

Если А>50%, тестируемая вода оказывает острое токсиче­ское действие, если А<50%, тестируемая вода не оказывает острого токсического действия на дафний.

Для определения степени острого токсического действия те­стируемой воды рассчитывают графическим методом:

ЛКр50-96 ч — кратность разбавления тестируемой воды, при которой гибнет 50% дафний за 96 ч;

ЛКр0-96 ч — минимальную кратность разбавления, при ко­торой дафнии не гибнут за 96 ч.